技术原理
蛋白质印迹(western blot, WB)是蛋白质组学分析中常规技术,实验原理就是在电场作用下,
通过凝胶电泳将蛋白质样品按照分子量大小不同进行分离;随后将凝胶内蛋白转移至固相支持物,
与特异性抗体结合后,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色、放射自显影或
化学反光灯多种方法从混合蛋白中检测出目标蛋白,从而定性或定量生物样本中目标蛋白的
表达情况。
技术优势
兼具SDS-PAGE的高分辨率和固相免疫测定的高特异性以及敏感性,
目前已成为蛋白质检测的经典方法之一。
实验流程
样品要求
1.样本 :
尽可能新鲜;
样本量:
细胞样本,质量大于100mg;
组织样本, 细胞数大于1×10的6次方;
2.抗体:
客户可以自备,也可以委托我公司代买。为保证服务质量,
我们承诺,抗体为品质最好的进口抗体。
样品制备须知
悬浮细胞: 取大约1×10的7次方个细胞,低速离心收集,弃用培养液,加入1mlPBS悬浮细胞,
转入小离心管中,低速离心沉淀细胞,弃用PBS,放入-70℃冰箱保存。然后干冰运输。
贴壁细胞:取大约1×10的7次方个细胞,胰酶消化后加入PBS悬浮细胞,低速离心收集,弃去
液体,加入1mlPBS悬浮细胞,转入小离心管中,低速离心沉淀细胞,弃用PBS,放入-70℃冰箱保存。
然后干冰运输。
组织:采集新鲜组织(生物体死亡后10分钟内取材料并保存好),组织块以PBS
或生理盐水清洗干净,切成小块,放入液氮或-70℃冰箱保存。然后干冰运输。
市内细胞样品可直接运送,运送时在培养瓶中装满培养液,并以封口膜封好,建议冻存后运输。
取样和存样所用冻存管、离心管、吸头等必须高温灭菌。所有存样管口需以封口膜封好。
如有特别要求,可直接与本公司取得联系。
我们为您提供
实验方法、步骤、所用试剂(包括抗体)、仪器、胶片和图片等相关分析数据。
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